骨基因檢測(cè)通常需要通過(guò)采集血液或唾液樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分析。檢測(cè)流程主要有樣本采集、DNA提取、基因測(cè)序、數(shù)據(jù)解讀四個(gè)步驟，建議在專(zhuān)業(yè)醫(yī)療機(jī)構(gòu)完成。

1、樣本采集

骨基因檢測(cè)需采集受檢者的生物樣本，常用方式包括靜脈采血和口腔黏膜拭子。靜脈采血由醫(yī)護(hù)人員使用無(wú)菌真空采血管抽取3-5毫升外周血，口腔拭子則通過(guò)刮取頰黏膜細(xì)胞獲取DNA。兩種樣本均可穩(wěn)定保存遺傳物質(zhì)，采血法DNA濃度更高，口腔拭子更適合兒童或畏針人群。采集前無(wú)須空腹，但需避免樣本污染。

2、DNA提取

實(shí)驗(yàn)室采用離心法分離血液中的白細(xì)胞或從拭子中裂解上皮細(xì)胞，通過(guò)蛋白酶消化、酚氯仿抽提等步驟提純DNA。現(xiàn)代自動(dòng)化核酸提取儀可在2小時(shí)內(nèi)完成96份樣本處理，提取的DNA需經(jīng)納米滴度儀檢測(cè)濃度和純度，OD260/280比值在1.7-1.9之間視為合格樣本。不合格樣本需重新采集或進(jìn)行DNA片段修復(fù)。

3、基因測(cè)序

針對(duì)骨代謝相關(guān)基因如COL1A1、VDR、LRP5等，采用二代測(cè)序技術(shù)進(jìn)行靶向捕獲測(cè)序。先將DNA片段化建庫(kù)，與目標(biāo)基因探針雜交后上機(jī)測(cè)序，Illumina平臺(tái)通常產(chǎn)生150bp雙端讀長(zhǎng)，每個(gè)樣本要求測(cè)序深度≥30X。對(duì)于疑似致病突變，需用Sanger測(cè)序驗(yàn)證。全基因組測(cè)序則適用于科研用途，需特殊生物信息學(xué)分析流程。

4、數(shù)據(jù)解讀

原始數(shù)據(jù)經(jīng)比對(duì)參考基因組后，由臨床遺傳學(xué)家結(jié)合ACMG指南進(jìn)行變異注釋。重點(diǎn)分析骨密度相關(guān)SNP如rs1800012、致病性突變?nèi)鏑OL1A1 Gly382Ser及藥物代謝基因如CYP2R1。報(bào)告需區(qū)分致病突變、可能致病突變、臨床意義未明突變?nèi)?lèi)，并評(píng)估骨質(zhì)疏松、成骨不全等疾病風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于兒童患者還需考慮生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)基因。

5、報(bào)告出具

最終報(bào)告包含檢測(cè)方法、基因位點(diǎn)、臨床意義及建議三部分。陽(yáng)性結(jié)果會(huì)注明遺傳模式常顯/常隱和再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)率，建議家系驗(yàn)證檢測(cè)。部分機(jī)構(gòu)提供遺傳咨詢(xún)師解讀服務(wù)，幫助理解檢測(cè)結(jié)果對(duì)補(bǔ)鈣方案、抗骨質(zhì)疏松用藥如雙膦酸鹽選擇的指導(dǎo)意義。檢測(cè)數(shù)據(jù)應(yīng)保存10年以上以備復(fù)查。

進(jìn)行骨基因檢測(cè)前應(yīng)充分了解檢測(cè)目的和局限性，避免過(guò)度解讀單核苷酸多態(tài)性的微效作用。檢測(cè)后可根據(jù)結(jié)果調(diào)整鈣劑和維生素D補(bǔ)充劑量，增加負(fù)重運(yùn)動(dòng)預(yù)防骨量流失。定期監(jiān)測(cè)骨密度變化，出現(xiàn)病理性骨折或堿性磷酸酶異常升高時(shí)需結(jié)合影像學(xué)檢查。保持均衡飲食，每日攝入800-1200毫克鈣元素，50歲以上人群建議每年進(jìn)行骨代謝標(biāo)志物檢測(cè)。